1. CLISA原理
CRISPR/Cas信号扩增连接磁珠免疫法（CRISPR/Cas signal amplification Linked ImmunoSorbent Assay）简称“CLISA”，可实现高灵敏磁微粒免疫检测技术。
结合传统三明治结构的免疫结合机制，用含有T7启动子序列生物素化双链DNA（dsDNA）取代酶（如辣根过氧化物酶HRP）放大体系。T7聚合酶识别启动子序列进行转录，产生大量单链RNA分子拷贝。crRNA识别转录RNA分子导致CRISPR/Cas13a反式切割活性激活。两端荧光团和猝灭基团标记的短ssRNA报告探针通过反式切割活性被切割。
相较于传统免疫检测方法，CLISA灵敏度可以提升1,000倍，检测限达到10-50fg/mL。
2. 主要试剂组分
试剂组分 | 用途 | 说明 |
磁珠溶液 | 捕获血清蛋白 | 捕获抗体标记的磁珠溶液 |
生物素标记抗人IgG抗体 | 标记结合生物素 | Biotin-IgG抗体溶液 |
SA-dsDNA | 结合抗人生物素 | 链霉亲和素偶联dsDNA，含有T7启动子结合序列 |
转录工作液 | 识别dsDNA探针,转录合成RNA | T7 RNA 聚合酶、RNA酶抑制剂、NTP、HEPES溶液 |
荧光工作液 | RNA激活Cas13a反式切割活性，切割报告RNA探针，释放荧光基团 | 含有Cas13a、crRNA、RNA报告探针（荧光基团与猝灭基团）HEPES溶液 |
校准品 | 抗原蛋白（工程化制备为主） | 浓度为0、0.01、0,05、0.5、5、50、500、5000pg/mL |
3. 检测性能
反应时间：3小时。免疫反应0.5小时，转录反应1小时，Cas荧光信号检测0.5小时。
线性范围：50fg/mL~5ng/mL
最低检测限：10fg/mL
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